Telah dilakukan penelitian terhadap penetapan kadar asam folat dalam bentuk sediaan tablet untuk membuktikan bahwa metode spektrofotometri UV dapat digunakan sebagai metode alternatif dalam proses penetapan kadar dan dapat memberikan hasil yang valid. Maka dilakukan validasi metode analisa penetapan kadar tablet asam secara spektrofotometri UV dengan melakukan pengujian terhadap parameternya yang meliputi uji linearitas, spesifitas, uji akurasi dan uji presisi. Penelitian ini diawali dengan menentukan panjang gelombang maksimum asam folat dan melakukan time scanning larutan asam folat menggunakan spektrofotometri UV. Dilanjutkan dengan melakukan validasi metode analisa penetapan kadar tablet asam folat secara spektrofotometri UV dengan parameter validasi yang diuji yaitu linearitas, spesifitas, akurasi dan presisi dengan konsentrasi 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 110%, 120%, 130%, dan 140%. Pada uji linearitas dihasilkan nilai koefisien korelasi sebesar 0,9998 dan nilai ini memenuhi persyaratan yang ditentukan. Uji spesifitas menghasilkan panjang gelombang maksimum yang tetap yaitu 365 nm. Kemudian pada uji presisi diperoleh nilai simpangan baku relatif (SBR) sebesar 0,0932 dan selanjutnya pada uji akurasi diperoleh nilai rata-rata perolehan kembali sebesar 100,3% dan nilai ini memenuhi persyaratan yang telah ditentukan. Metode analisa ini kemudian digunakan untuk penetapan kadar tablet asam folat yang beredar di pasaran. Dilakukan juga penetapan kadar terhadap tablet asam folat yang beredar di pasaran secara spektrofotometri UV sebanyak tiga produk. Hasil rata-rata kadar asam folat dari tiga produk masing-masing 100,3%, 110,7%, dan 112%. Hasil penetapan kadar asam folat memenuhi persyaratan Farmakope Indonesia. Validasi metode analisa penetapan kadar tablet asam folat secara spektrofotometri UV telah valid karena semua parameter validasi yang diuji telah memenuhi kriteria penerimaan validasi, dan dapat diterapkan untuk penetapan kadar tablet asam folat.