Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh E- Learning UHAMKA terhadap motivasi belajar mahasiswa Fakultas Agama Islam di UHAMKA. Metode penelitian yang digunakan yaitu penelitian kuantitatif dengan teknik analisis yang digunakan yakni analisis regresi linear sederhana menggunakan software SPSS versi 25. Sampel penelitian ini melibatkan 287 responden mahasiswa FAI angkatan 2018, 2019 dan 2020 pengguna Online Learning UHAMKA (OLU) berdasarkan 11 dosen yang aktif menggunakan OLU, teknik pengambilan data dengan menyebar kuesioner menggunakan google forms. Hasil penelitian menunjukkan bahwa hasil regresi dengan nilai signifikansi sebesar 0,000 yang kurang dari 0,05 dan nilai t-hitung yang lebih besar dari t-tabel sebesar 10,691 > 1,650. nilai R Square menunjukkan bahwa motivasi belajar mahasiswa dipengaruhi sebesar 28,6% dalam penelitian ini dan sebesar 71,4% dipengaruhi oleh variabel dari luar penelitian. Berdasarkan hasil penelitian tersebut maka terdapat pengaruh positif dan signifikan antara penggunaan Online Learning UHAMKA terhadap motivasi belajar mahasiswa FAI di UHAMKA.