Kelabet (Trigonella foenum-graecum L.), suku: Papilionaceae, merupakan salah satu tanaman obat yang berkhasiat sebagai antikanker, tetapi golongan senyawa bioaktif yang bertanggung jawab untuk aktivitas tersebut belum diteliti. Oleh karena itu tujuan penelitian ini adalah melakukan isolasi dan identifikasi golongan senyawa sitotoksik dari biji kelabet (Trigonella foenum-graecum). Metode penelitian ini dimulai dari ekstraksi simplisia biji kelabet dengan metanol menggunakan metode maserasi. Kemudian dilanjutkan dengan partisi ekstrak metanol biji kelabet dengan berbagai macam pelarut, yaitu n-heksan, etil asetat, n-butanol dan air. Hasil partisi diuji terhadap larva Artemia sauna L. Fraksi yang mempunyai aktivitas tertinggi diprioritaskan untuk difraksinasi lebih lanjut_.Berdasarkan hasil uji BSLT, fraksi etil asetat mempunyai aktivitas tertinggi dengan persen kematian 96,667 %. Selanjutnya fraksi etil asetat diprioritaskan untuk tahap pemisahan. Pemisahan senyawa fraksi etil asetat dilakukan dengan kromatografi kolom vakum dan kromatografi kolom_. Masing - masing fraksi diuji aktivitas dengan metode BSLT. Fraksi yang paling aktif diisolasi secara kromatografi lapis tipis preparatif dan dilakukan uji kemurnian dengan KLT dua arah. Hasil penelitian menyatakan bahwa fraksi E.3.2.2 adalah isolat yang mempunyai aktivitas sitotoksik dengan nilai LC50 66,71 ppm (< 1000 ppm) dengan uji BSLT. Uji kualitatif dengan pereaksi semprot menyatakan bahwa isolat termasuk golongan senyawa steroid.